影響質粒提取的因素：質粒提取的得率和質量與很多因素有關，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細胞的裂解、質粒拷貝數、質粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌種類質粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，多數情況下我們是從大腸桿菌中提取質粒。大腸桿菌的菌株不同會影響質粒提取的質量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質量的質粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG...

質粒提取原理及流程：較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質粒（15kb）。堿裂解法是一種應用為廣泛的制備質粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質粒DNA為共價閉合環(huán)狀分子；當用堿處理DNA溶液時，線狀染色體DNA容易發(fā)...

質粒DNA分離和純化：純化要求質粒DNA中不應存在對后續(xù)實驗中的酶活性有抑制作用的有機溶劑分子或過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實驗對于質粒純度的要求不同，常規(guī)的分子生物學實驗（如酶切、測序等）普通純度的質粒即可滿足實驗，而對于轉染實驗，要求質粒的純度較高（如高純度或無內毒素）。可以選擇不同的質粒提...

Lowry法蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0030-10001000T280.00產品簡介：Lowry法包括兩步反應：*步是在堿性條件下，蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物；第二步是此絡合物將Folin試劑還原，產生深藍色，顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有...

BCA蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0020-500500T280.00產品簡介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個Cu+螯合形成穩(wěn)定的紫藍色復合物，在562nm處有高的光吸...

Bradford蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0010-25002500T150.00產品簡介：Bradford法是常用的蛋白質快速定量方法。CoomassiebrilliantblueG-250與蛋白質結合使染料的大吸收峰由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色，595nm波長下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相...

蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡稱TEMED）和催化劑過硫酸銨（簡稱AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯(lián)成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡稱PAGE）S...

胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實驗全程中可以抑制RNase的活性，保護RNA不被降解。

異硫氰酸胍/苯酚法異硫氰酸胍/苯酚法是一種傳統(tǒng)的RNA提取方法，適用于大部分動植物材料，但對于次生代謝產物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚/氯仿混合液抽提，低pH值的酚將使RNA進入水相，而蛋白質和DNA仍留在有機相，從而可以完成RNA的提取工作。Solarbio公司的Trizol和總RNA...

DNA的儲存儲存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩(wěn)定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強的緩沖對）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價金屬陽離子，抑制DNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲存液，但有...

基因組DNA提取的原則1、保證核酸一級結構的完整性（因為遺傳信息全部儲存在核酸一級結構中，故完整的一級結構是保證核酸結構與功能研究的基礎）。2、排除其它分子（如蛋白質、多糖、脂類、有機溶劑等）的污染，使下游試驗順利進行。

RNA純化及獲得純化要求RNA樣品中不應存在對酶（如逆轉錄酶）有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染。排除DNA分子的污染。純化方法及沉淀1、有機溶劑抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取試劑進行RNA提取時，常使用氯仿進行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質，并促進水相與有機相的分離，從而達到純化RNA的目的。沉淀：氯...

RNA評價與鑒定提取得到RNA溶液后，我們需要對RNA進行相關的質量檢測，以確定它是否符合后續(xù)實驗的要求。RNA用于不同的后續(xù)實驗，對其質量要求不盡相同。cDNA文庫構建要求RNA完整且無酶等抑制物殘留；Northernblot實驗對RNA完整性要求較高，對酶反應抑制物殘留要求較低；RT-PCR實驗對RNA完整性要求不太高，但對酶反應抑制物殘留要求嚴格。因此...

RNA的保護與DNA提取實驗相比，RNA的提取實驗常常較為困難，這主要是由于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因來自內因和外因兩個方面。內因：RNA核糖殘基的2’和3’位置帶有羥基，易被水解；外因：生物體內和外部環(huán)境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，高溫后仍然能夠正確折疊恢復活性。因此，從樣品的儲存、RNA的提取以及RNA提取完成后的保存，...

細胞從培養(yǎng)皿上的解離以下通用步驟可以在保持細胞完整性的同時從培養(yǎng)器皿中分離多種細胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細胞系。應通過實驗來確定不同體系所需的佳條件和濃度。?在傳代培養(yǎng)時監(jiān)測細胞存活率。?細胞存活率應大于90%。?對于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。1．去除器皿中原有細胞培養(yǎng)基。2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與...